制備及其進展
方法：提取基因組DNA作為模板，通過PCR擴增得到酶基因，經DNA體外重組構建表達質粒。結果：實現(xiàn)在大腸桿菌中的表達，并成功轉化黃原膠菌株。轉化過程提示黃原膠菌株可能具有某些特殊性。
建立了一種經濟、簡便的一步酶法，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中，用UTP代替ATP，并建立了UTP的再生系統(tǒng)；建立了反復補加法和酶回收法，使酶的利用率達到最高。
黃原膠是由野油菜黃單胞菌（Xanthomonascampestris）分泌的胞外雜多糖，是目前產量最高的微生物多糖之一，具有假塑性、溫度和pH穩(wěn)定性，以及與鹽類良好的相容性，廣泛應用于食品、石油、化工、醫(yī)藥等領域。國外關于黃原膠的研究從20世紀60年代起步，國內自70年代開始，包括菌種選育、發(fā)酵工藝研究、黃原膠理化性質探討及其免疫學活性分析等。經查閱資料發(fā)現(xiàn)，在黃原膠的合成過程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶（uridinediphosphateglucosedehydrogenase，UDPGD）的催化才能生成葡萄糖醛酸，而后者是黃原膠生物合成的前體之一。故此，我們設想以黃原膠菌株基因組DNA為模板，通過合成引物、擴增、克隆得到UDPGD基因，在實現(xiàn)大腸桿菌的表達后，再轉入原黃原膠菌株，希望UDPGD酶量的增加能夠帶來黃原膠產量增加的正效應。文獻報道UDPGD基因全長1338bp，285bp處含PstⅠ切點，740bp處含BamHⅠ切點，編碼445個氨基酸，蛋白相對分子質量48432。經過實驗，我們對UDPGD的研究工作取得了初步結果。
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