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胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)的使用說明
  • 發(fā)布日期:2023-04-24      瀏覽次數(shù):1218
    • 產(chǎn)品說明:

      在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞外基質(zhì))水解,使組織或貼壁細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

      胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA(0.53mM),溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,經(jīng)過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。胰蛋白酶-EDTA消化液具有方便快速、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類產(chǎn)品,酚紅具有pH 指示作用。


      使用方法:

      1. 貼壁細(xì)胞的消化:

      a) 吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA消化液,蓋過細(xì)胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。

      c) 顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的規(guī)格100ml 100ml 備注不含酚紅含酚紅

      變化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

      d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA消化液重新消化。

      e) 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

      2. 組織的消化:

      不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。


      注意事項(xiàng):

      1.由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況,確定最佳消化時(shí)間;消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)狀況;

      2.本產(chǎn)品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無(wú)菌操作,避免消化液被微生物污染;

      3.不宜4℃長(zhǎng)期保存,切忌反復(fù)凍融,小量使用時(shí)建議分裝凍存;

      4.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


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