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如何辨別細胞培養(yǎng)血清?
  • 發(fā)布日期:2023-05-25      瀏覽次數(shù):740
    • 一、外觀

      1、顏色

      根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛血清。進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。總的來說,國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質(zhì)量呈現(xiàn)出談黃、微紅色。當然,熱滅活血清或保存不當?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。

      2、沉淀:很多血清客戶,會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問題,這是沒有根據(jù)的。血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質(zhì)量沒有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。國產(chǎn)的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運輸?shù)缴a(chǎn)會經(jīng)過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈",很少有沉淀產(chǎn)生。進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會渾濁,甚至有大量沉淀。當然,購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程最好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

      3、澄清度進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國產(chǎn)血清,因為絕大多數(shù)是新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深,這對于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進行對比,可容易分辨。

       

      二、主要技術(shù)指標

      1、內(nèi)毒素標準為不高于5EU/ml

      內(nèi)毒素是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產(chǎn)血清基本都能達到這一要求,很多進口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高,內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量,除非含量高,預示著已經(jīng)污染。

      2、總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml

      數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。

      3、血紅蛋白標準為不高于20mg/dl

      顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。

      4、pH

      國產(chǎn)血清、大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。

      5、微生物

      包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難清除,但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,特別是BVDV,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進口胎牛血清中基本都控制的很好。

      6、免疫球蛋白

      國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結(jié)果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

      7、其它

      不管是國產(chǎn)還是進口血清,都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血清除外)。國外,抗生素的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內(nèi),抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

       

      三、血源

      市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。

      1、國產(chǎn)血清質(zhì)量差,主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責任,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國內(nèi)環(huán)境污染嚴重,同時飼養(yǎng)過程中抗生素極其濫用,有毒有害物質(zhì)會大量殘留在血清中,最終不利于細胞的生長。

      2、南美血清,來源很多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清由于采血的不可控性,質(zhì)量參差不齊,當然,相對于國內(nèi)血清來說好的多。另外,國內(nèi)銷售的南美血清大多顏色鮮紅,如Sera Pro、Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。

      3、北美血清,主要來自美國和加拿大,如Sera Pro的S742S-500,Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清,等級越高的顏色越淡,表現(xiàn)為淡黃中帶一點微紅,SH30070和SH30396對比就很明顯,特級胎牛血清基本就能進行干細胞培養(yǎng)。北美血清還有一個顯著特點就是每瓶血清都能溯源。

      4、澳洲血清,來源主要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運之后進入中國市場的,一般不具有溯源功能,由于生產(chǎn)、運輸?shù)仍?,價格相對來說比較貴。


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