超濾是大分子脫鹽、濃縮的方法,重復(fù)性好,得率有保障,已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作;在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法。
超濾管該如何使用?注意事項有哪些?讓我們一起來看看吧!
使用方法
1、預(yù)處理:
新超濾管:使用前用純水浸泡,冰箱預(yù)冷10 min。然后將水倒出,置于冰上預(yù)冷2-5 min,加樣。
舊超濾管:倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液,用純水沖洗干凈10遍(注意水流速盡量平緩,防止沖破濾膜),置于冰上預(yù)冷2-5 min,加樣。
2、加樣:
如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置1000×g離心1 min,移液槍移取適量樣本加入超濾管中。
3、離心:
配平,12000 ×g離心(15-30 min),等達(dá)到目的轉(zhuǎn)速后方可離開。
4、樣本收集 :
外管濾液為除去部分蛋白的樣本上清,如需取濃縮后樣本用于其他實驗,則另取外管,內(nèi)管倒置,1000×g離心1-2 min。
5、超濾管清洗
使用完的超濾管用純水反復(fù)清洗5次,再用75%乙醇沖洗3次。
注意事項
1、短時間存放與保存:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,純水清洗,然后用75%乙醇浸泡,務(wù)必使濾膜保持濕潤,不能長菌。
2、長時間放置超濾管處理:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,純水清洗,然后用20%乙醇浸泡,務(wù)必使濾膜保持濕潤,不能長菌。
3、超濾管最大離心力不能超過12000g ,否則會導(dǎo)致濾膜破損。
4、超濾樣本會損失五分之一至二分之一的樣本量,主要取決于樣本中蛋白含量。
5、若管底有可見的蛋白沉淀,可以先加入純水,然后用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀懸起,然后倒掉,不可用自來水猛沖。
6、超濾管內(nèi)管不能用烘箱進行烘干。