小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA Kit

小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA Kit

試劑盒工作原理

本試劑盒采用的是生物/素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定樣品中小鼠腫瘤壞死因子α水平。向預(yù)先包被了小鼠腫瘤壞死因子α單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入小鼠腫瘤壞死因子α，溫育；溫育后，加入生物/素標(biāo)記的抗小鼠腫瘤壞死因子α抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠腫瘤壞死因子α的濃度呈正相關(guān)。

實(shí)驗(yàn)操作步驟

1. 從室溫平衡30min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.加樣：1）空白孔，空白對(duì)照孔只加顯色劑A&B和終止液。其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul；3）待測(cè)樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul；

3.蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

4. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置30秒，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

6. 每孔加入終止液50μL，10min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

7.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。